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微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)教案
課題1 微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)
【課標(biāo)解讀】
1、知道培養(yǎng)基的基礎(chǔ)知識(shí)，進(jìn)行無菌技術(shù)的操作
2、進(jìn)行微生物的培養(yǎng)
【教學(xué)重難點(diǎn)】無菌技術(shù)的操作
【教學(xué)過程】
（一）引入新課
2007年，由國家標(biāo)準(zhǔn)委和衛(wèi)生部聯(lián)合發(fā)布的《生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》（GB 5749-2006）強(qiáng)制性國家標(biāo)準(zhǔn)和13項(xiàng)生活飲用水衛(wèi)生檢驗(yàn)國家標(biāo)準(zhǔn)正式實(shí)施。新標(biāo)準(zhǔn)中的飲用水水質(zhì)指標(biāo)由原標(biāo)準(zhǔn)的35項(xiàng)增至106項(xiàng)，增加了71項(xiàng)。其中，微生物指標(biāo)由2項(xiàng)增至6項(xiàng)，其中大腸桿菌要求每公升水中不得超過3個(gè)。你用什么辦法將他們找到并準(zhǔn)確計(jì)數(shù)？
在傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)的應(yīng)用中，都利用了微生物的發(fā)酵作用，其中的微生物來自于制作過程中的自然感染。而在工業(yè)化生產(chǎn)中，為了提高發(fā)酵的質(zhì)量，需要獲得優(yōu)良菌種，并保持發(fā)酵菌種的純度。這就要涉及到微生物的培養(yǎng)、分離、鑒別等基本技術(shù)。現(xiàn)在我們開始學(xué)習(xí)微生物的培養(yǎng)和應(yīng)用專題。
（二）進(jìn)行新課
一、基礎(chǔ)知識(shí)
1、培養(yǎng)基（閱讀教材）
1.1概念（略）
1.2培養(yǎng)基的種類
(1)形態(tài)——固體和液體培養(yǎng)基（瓊脂）
(2)成分——天然和合成培養(yǎng)基
(3)作用——選擇和鑒別培養(yǎng)基
思考：1、固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基你認(rèn)為哪個(gè)更適合工業(yè)生產(chǎn)？為什么？
2、如何區(qū)分S型細(xì)菌和R型細(xì)菌？
3、什么是菌落？
【補(bǔ)充】培養(yǎng)基的類型及其應(yīng)用：（創(chuàng)新設(shè)計(jì)）
思考：1、硝化細(xì)菌、藍(lán)藻與酵母菌的C源和N源有不同嗎？能源呢？
2、結(jié)合細(xì)胞元素組成說明大多數(shù)培養(yǎng)基的組成為何有4類？一定都需要嗎？
1.4培養(yǎng)條件——營養(yǎng)物質(zhì)（特殊營養(yǎng)物質(zhì)—生長因子）、PH、氧氣
思考：1、微生物的營養(yǎng)物質(zhì)就是4類嗎? 牛肉膏和蛋白胨能為微生物提供哪些營養(yǎng)？
2、特殊營養(yǎng)物質(zhì)是什么？試舉一例。(介紹生長因子)
3、你能將土壤中酵母菌、硝化細(xì)菌、乳酸菌、固氮菌分離出來嗎？說一說最佳方案。
4、分離菌種是否一定要選擇培養(yǎng)基？
培養(yǎng)乳酸桿菌時(shí)需要添加 維生素 ，培養(yǎng)霉菌時(shí)需要將培養(yǎng)基pH調(diào)節(jié)為 酸性 ，培養(yǎng)細(xì)菌時(shí)需要將pH調(diào)節(jié)為 中性或微堿性 。
2、無菌技術(shù)（閱讀并思考回答下列問題）
2.1意義、對(duì)象
2.2消毒與滅菌的區(qū)別
2.3消毒與滅菌的方法、適用對(duì)象
思考：1、什么是巴氏消毒法？灼燒滅菌和高壓蒸汽滅菌特別注意什么？
2、以下各項(xiàng)分別適用哪項(xiàng)無菌技術(shù)？簡單說明理由
試管口；培養(yǎng)基；接種操作間；葡萄酒；培養(yǎng)皿；接種針（環(huán)）；口罩；手；空氣；飲用水
3、無菌技術(shù)除了防止培養(yǎng)物被污染外，還具有什么目的？
二．實(shí)驗(yàn)操作（錄像）
1、制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基
程序：
計(jì)算—稱量—溶化—調(diào)pH—滅菌—倒平板
思考：1、為何將牛肉膏連同稱量紙一起放入燒杯溶化？
2、制備過程中要調(diào)節(jié)適宜的PH值，要在哪一個(gè)環(huán)節(jié)操作？為什么？
3、請閱讀倒平板操作（P17）并回答討論1—4
4、試管培養(yǎng)基常制成斜面的作用是什么？
2、接種（4種方法）
2．1平板劃線法：通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基表面。其操作步驟是：
2.1.1目的
2.1.2平板劃線操作（略）
思考：請回答P18討論1—3
2．2 稀釋涂布平板法：將菌液進(jìn)行一系列梯度稀釋，并將不同稀釋度菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)。當(dāng)稀釋倍數(shù)足夠高時(shí)，即可獲得單個(gè)細(xì)菌形成的標(biāo)準(zhǔn)菌落。
2.2.1目的
2.2.2系列稀釋操作：
①取盛有9mL水的無菌試管6支，編號(hào)101、102、103、104、105、106。 ②用灼燒冷卻的移液管吸取1mL菌液注入編號(hào)為101試管中，并吹吸3次，使之混勻。
③從101倍液中吸取1mL菌液注入到編號(hào)為102試管內(nèi)吹打均勻，獲得102倍液。依此類推。
思考：為什么操作中試管口和移液管應(yīng)在離火焰1～2cm處？整個(gè)操作過程中使用了幾支移液管？
2．2.3涂布平板操作
思考：1、涂布器操作要點(diǎn)及原因
2、教材P19討論
3、結(jié)果分析評(píng)價(jià)
3．1培養(yǎng)未接種培養(yǎng)基的作用是對(duì)照，若有菌落形成，說明培養(yǎng)基滅菌不徹底。
3．2 如果在培養(yǎng)基上觀察到不同形態(tài)的菌落，請你分析原因？
3．3 培養(yǎng)12h和24h后的菌落大小、位置相同嗎？；原因是什么？。
4、課題延伸
頻繁使用的菌種利用臨時(shí)保藏法保存，長期保存菌種的方法是甘油管藏法。前者利用固體斜面培養(yǎng)基培養(yǎng)后，保存在4℃冰箱中，每3～6個(gè)月轉(zhuǎn)種培養(yǎng)一次，缺點(diǎn)是保存時(shí)間較短，容易發(fā)生污染和變異；后者將菌種與無菌體積等量混合后保存在－20℃冷凍箱中。
（四）課堂總結(jié)、點(diǎn)評(píng)
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