磁珠富集法開(kāi)發(fā)北柴胡多態(tài)性簡(jiǎn)單序列重復(fù)標(biāo)記

目的:利用磁珠富集法分離北柴胡微衛(wèi)星序列,以開(kāi)發(fā)北柴胡微衛(wèi)星引物,獲得有多態(tài)性的簡(jiǎn)單序列重復(fù)(SSR)標(biāo)記.方法:用生物素標(biāo)記的混合探針(AC)15、(AG)15、(MAB)12和兩端連接已知序列人工接頭的北柴胡基因組DNA酶切片段混和后與磁珠雜交,構(gòu)建微衛(wèi)星序列富集的小片段插入文庫(kù);利用接頭引物分別與生物素探針引物Biotin-(AC)15、Biotin-(AG)15、Biontin-(MAB)12形成3個(gè)組合,用PCR方法對(duì)文庫(kù)進(jìn)行初步篩選;對(duì)可能的陽(yáng)性克隆子進(jìn)行測(cè)序復(fù)篩,選取微衛(wèi)星側(cè)翼序列足夠長(zhǎng)的序列設(shè)計(jì)引物,用熒光標(biāo)記的基因分型技術(shù)以栽培柴胡種質(zhì)為材料分析其多態(tài)性.結(jié)果:開(kāi)發(fā)了5對(duì)多態(tài)性SSR標(biāo)記,它們?cè)?份柴胡栽培種質(zhì)中共擴(kuò)增出30.70個(gè)多態(tài)性等位基因,平均每條引物可以擴(kuò)增出6.14個(gè)多態(tài)性等位基因;觀察等位基因數(shù)最多13個(gè),最少3個(gè);有效等位基因數(shù)最多11.4個(gè),最少1.6個(gè).同時(shí)分析了4對(duì)EST-SSR引物,比較了2種SSR標(biāo)記擴(kuò)增結(jié)果.結(jié)論:磁珠富集法是開(kāi)發(fā)柴胡多態(tài)性SSR標(biāo)記的有效方法.

作 者： 陳懷瓊 鄭亭亭 魏建和 隋春 CHEN Huai-Qiong ZHENG Ting-Ting WEI Jian-He SUI Chun   作者單位： 中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院,藥用植物研究所,北京,100193  刊 名： 生物技術(shù)通訊  ISTIC 英文刊名： LETTERS IN BIOTECHNOLOGY  年，卷(期)： 2010 21(2)  分類號(hào)： Q75  關(guān)鍵詞： 柴胡   簡(jiǎn)單序列重復(fù)   磁珠富集法   基因分型  

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