- 相關(guān)推薦
重組人β干擾素在DHFR--CHO細(xì)胞中的高效表達(dá)
目的 由二氫葉酸還原酶缺陷型的中國(guó)倉鼠卵巢(DHFR--CHO)細(xì)胞高效表達(dá)重組人β干擾素(rhIFN-β),比較來源于E.coli、Yeast和CHO細(xì)胞的IFN-β抗增殖活性.方法 采用PCR技術(shù),從pLG104R載體中擴(kuò)增目的 基因,經(jīng)XhoⅠ和SmaⅠ雙酶切后克隆到真核表達(dá)載體pCI-dhfr中,采用陽離子脂質(zhì)體介導(dǎo)方法,將構(gòu)建的表達(dá)載體轉(zhuǎn)染到CHO細(xì)胞中.通過MTX的加壓篩選,以病毒誘導(dǎo)的細(xì)胞病變抑制(CPEI)法進(jìn)行活性定量檢測(cè),獲得穩(wěn)定、高效表達(dá)rhIFN-β的CHO細(xì)胞株,并擴(kuò)大培養(yǎng).分離純化后,定量并鑒定表達(dá)產(chǎn)物.采用四甲基偶氮唑鹽(MTT)法比較E.coli、Yeast和CHO細(xì)胞表達(dá)體系所生產(chǎn)的rhIFN-β的抗增殖活性.結(jié)果 得到由CHO細(xì)胞株表達(dá)的rhIFN-β純品,且抗增殖活性顯著高于其他2個(gè)表達(dá)體系.結(jié)論 CHO細(xì)胞可大規(guī)模生產(chǎn)rhIFN-β,且活性高于其他表達(dá)體系,顯示了以CHO細(xì)胞為生產(chǎn)平臺(tái)的優(yōu)越性.
作 者： 史艷秋 陳暢 顧黎 鄒思湘 宋靜 王鵬 SHI Yan-qiu CHEN Chang GU Li ZOU Si-xiang SONG Jing WANG Peng 作者單位： 史艷秋,SHI Yan-qiu(南京農(nóng)業(yè)大學(xué),動(dòng)物醫(yī)學(xué)院,江蘇,南京,210095;山東大學(xué),微生物技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,山東,濟(jì)南,250100)陳暢,顧黎,宋靜,王鵬,CHEN Chang,GU Li,SONG Jing,WANG Peng(山東大學(xué),微生物技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,山東,濟(jì)南,250100)
鄒思湘,ZOU Si-xiang(南京農(nóng)業(yè)大學(xué),動(dòng)物醫(yī)學(xué)院,江蘇,南京,210095)
刊 名： 中國(guó)生化藥物雜志 ISTIC PKU 英文刊名： CHINESE JOURNAL OF BIOCHEMICAL PHARMACEUTICS 年，卷(期)： 2006 27(3) 分類號(hào)： Q786 R512.6+2 關(guān)鍵詞： 中國(guó)倉鼠卵巢細(xì)胞 β干擾素 真核表達(dá) 抗增殖活性【重組人β干擾素在DHFR--CHO細(xì)胞中的高效表達(dá)】相關(guān)文章：
RNAi抑制IEC-6細(xì)胞中ERp29表達(dá)04-26
重組人PCNA突變體的克隆與穩(wěn)定表達(dá)04-26
熒光蛋白標(biāo)記的GABAB受體在CHO中的表達(dá)及亞細(xì)胞定位04-27
豬圓環(huán)病毒2型Rep蛋白在真核細(xì)胞中的表達(dá)與定位04-26
少突膠質(zhì)細(xì)胞與2型星形膠質(zhì)細(xì)胞中S-100 β表達(dá)差異性的研究04-27
電離輻射后ERp29蛋白在IEC-6細(xì)胞中的表達(dá)04-26
EGFP基因在中國(guó)明對(duì)蝦原代培養(yǎng)細(xì)胞中的導(dǎo)入和表達(dá)04-26
血管生成素在COS-7細(xì)胞中的表達(dá)及其生物活性研究04-27