通用型奶牛多位點(diǎn)基因打靶載體系統(tǒng)的構(gòu)建

以奶牛為研究對(duì)象,以其重復(fù)的rRNA基因間的間隔序列為靶位點(diǎn),基于BAC重組酶系統(tǒng)構(gòu)建多位點(diǎn)基因打靶載體,為建立體內(nèi)多位點(diǎn)基因打靶技術(shù)獲得關(guān)鍵材料.首先構(gòu)建BAC-TDN篩選載體,然后構(gòu)建pYLVS-GD表達(dá)載體.將BAC-TDN篩選載體和pYLVS-GD表達(dá)載體共轉(zhuǎn)化至大腸桿菌NS3529中,通過(guò)Cre重組酶的作用形成BAC-TDN-VS-GD質(zhì)粒,采用歸位內(nèi)切酶I-Sce Ⅰ切除pYLVS載體骨架,構(gòu)建奶牛多位點(diǎn)基因打靶載體BAC-TDN-GD,利用接頭LS使之環(huán)化.BAC-TDN-GD打靶載體與pYLSV質(zhì)粒組成了通用型奶牛多位點(diǎn)打靶載體系統(tǒng).以重復(fù)序列為靶位點(diǎn)的多位點(diǎn)基因打靶技術(shù),將部分解決目前存在的打靶效率低、安全性差等問(wèn)題.

作 者： 蔣泓 唐冬生 李月琴 張欣 李芳 胥斯卡 周天鴻 JIANG Hong TANG Dong-sheng LI Yue-qin ZHANG Xin LI Fang XU Si-ka ZHOU Tian-hong   作者單位： 蔣泓,李月琴,張欣,胥斯卡,周天鴻,JIANG Hong,LI Yue-qin,ZHANG Xin,XU Si-ka,ZHOU Tian-hong(暨南大學(xué)生物工程學(xué)系,廣東,廣州,510632)

唐冬生,TANG Dong-sheng(暨南大學(xué)生物工程學(xué)系,廣東,廣州,510632;佛山科學(xué)技術(shù)學(xué)院醫(yī)學(xué)院,廣東,佛山,528000)

李芳,LI Fang(佛山科學(xué)技術(shù)學(xué)院醫(yī)學(xué)院,廣東,佛山,528000) 

刊 名： 暨南大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)與醫(yī)學(xué)版）  ISTIC PKU 英文刊名： JOURNAL OF JINAN UNIVERSITY（NATURAL SCIENCE & MEDICINE EDITION）  年，卷(期)： 2006 27(3)  分類(lèi)號(hào)： Q782  關(guān)鍵詞： 基因打靶   多位點(diǎn)   細(xì)菌人工染色體   重組酶系統(tǒng)   奶牛   重復(fù)序列  

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