堆肥中微生物總DNA的高效提取

采用化學(xué)裂解和酶解相結(jié)合的方法,選擇加入PVPP的高鹽緩沖液作為細(xì)胞裂解的反應(yīng)體系,并以PEG-8000進(jìn)行DNA沉淀,從高有機(jī)含量的堆肥樣品中進(jìn)行微生物總DNA的提取.結(jié)果表明,從4種性質(zhì)不同的堆肥中均獲得了高質(zhì)量的微生物總DNA,所得的DNA分子片段在23kb左右;每克干重堆肥的總DNA提取量為63.54±12.08μg～106.50±28.36μg,A260/A280大于1.6,A260/A230大于1.8,不用經(jīng)過純化可以直接進(jìn)行PCR擴(kuò)增和限制性酶切;以該DNA為模板進(jìn)行微生物區(qū)系的DGGE分析,顯示了豐富的微生物多樣性.該方法減少了通常環(huán)境樣品DNA提取過程中的純化步驟,減少了DNA的損失,為從事微生物分子生態(tài)學(xué),尤其是那些針對(duì)高有機(jī)含量以及獲取極為不易的環(huán)境樣品的研究而言是十分有益的.

作 者： 何麗鴻 趙勇 陳明杰 潘迎捷 HE Li-hong ZHAO Yong CHEN Ming-jie PAN Ying-jie   作者單位： 何麗鴻,趙勇,HE Li-hong,ZHAO Yong(南京農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)院微生物學(xué)系,南京,210095;上海市農(nóng)業(yè)遺傳育種重點(diǎn)開放實(shí)驗(yàn)室,上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院食用菌研究所,上海,201106)

陳明杰,CHEN Ming-jie(上海市農(nóng)業(yè)遺傳育種重點(diǎn)開放實(shí)驗(yàn)室,上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院食用菌研究所,上海,201106)

潘迎捷,PAN Ying-jie(南京農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)院微生物學(xué)系,南京,210095;上海水產(chǎn)大學(xué),上海,200090) 

刊 名： 微生物學(xué)報(bào)  ISTIC PKU 英文刊名： ACTA MICROBIOLOGICA SINICA  年，卷(期)： 2006 46(1)  分類號(hào)： Q78  關(guān)鍵詞： 堆肥   DNA的高效提取   高有機(jī)含量   DGGE  

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