應(yīng)面法優(yōu)化曲霉產(chǎn)多糖培養(yǎng)基的研究

　　一、本課題研究現(xiàn)狀及可行性分析

　　本課題研究現(xiàn)狀：

　　多糖具有各種生理活性，活性多糖的保健功能是目前保健食品功能因子中研究焦點(diǎn)之一。活性多糖作為一類有前途的天然藥物，在預(yù)防和治療腫瘤、艾滋病等頑癥上已顯示出誘人的前景，但目前能夠用于臨床的多糖藥物并不多，近年來,有大量有關(guān)糖保健功能的研究報道，主要集中在多糖的促進(jìn)免疫、抗腫瘤、抗病毒等方面。另外，多糖來具有降血糖、降血脂、抗腫瘤、阻抗放射性元素和毒素的吸收等作用。 從真菌中尋找新型藥物已為世界矚目，這是一個亟待開發(fā)的自然寶庫，對生命科學(xué)、醫(yī)藥科學(xué)的研究與開發(fā)具有重要意義。在了解真菌多糖化學(xué)結(jié)構(gòu)、組成成分和生物活性的基礎(chǔ)上，提高多糖產(chǎn)量具有現(xiàn)實(shí)意義。本研究采用響應(yīng)面法對曲霉產(chǎn)多糖培養(yǎng)基進(jìn)行優(yōu)化，為多糖產(chǎn)量提高和后繼發(fā)酵放大試驗(yàn)研究奠定基礎(chǔ)。

　　可行性分析：

　　實(shí)驗(yàn)所需條件和儀器具備：電熱恒溫培養(yǎng)箱、電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱、超凈作臺、立式壓力蒸汽滅菌鍋、CCS45恒箱培養(yǎng)搖床、水浴鍋、721分光光度計、電子天平、pH計、燒杯、錐形瓶、培養(yǎng)皿等，實(shí)驗(yàn)藥品滿足，本課題的研究方案已經(jīng)設(shè)計完畢。

　　二、本課題研究的關(guān)鍵問題及解決問題的思路

　　1、研究的關(guān)鍵問題

　　本課題研究的關(guān)鍵問題主要是確定影響曲霉產(chǎn)多糖培養(yǎng)基中的主要因素，確定因素水平以及響應(yīng)值的測定，利用響應(yīng)面法分析結(jié)果分析結(jié)果。

　　2、解決問題的思路

　　曲霉由本院微生物實(shí)驗(yàn)室篩選獲得，先將曲霉接種于種子培養(yǎng)基（PDA液體培養(yǎng)基）培養(yǎng)一段時間后接種于發(fā)酵培養(yǎng)基，待發(fā)酵完成后，測多糖含量，本實(shí)驗(yàn)所用方法是苯酚硫酸法和3,5-二硝基水楊酸比色法（DNS法）。苯酚硫酸法測得的是總糖量，DNS法測得的是還原糖量，多糖量=總糖量-還原糖量。苯酚易氧化，見光或空氣逐漸變成淡紅色，因此測定時盡可能避光且操作迅速。苯酚在水中溶解度較小，故需限制苯酚用量，否則會生成乳白色沉淀或針狀結(jié)晶而干擾測定。采用Plackeet-Burman法對發(fā)酵培養(yǎng)基中碳源、氮源、無機(jī)鹽、磷酸鹽幾種主要營養(yǎng)成分影響曲霉產(chǎn)多糖量的多少進(jìn)行優(yōu)化。最后分析結(jié)果。

　　三、論文綱要

　　（一）概述：簡要介紹關(guān)于多糖保健作用的情況。

　�。ǘ�）材料與方法：

　　1．曲霉

　　2．培養(yǎng)基制備

　　3. 培養(yǎng)條件

　　4．糖含量測定

　　5．響應(yīng)面法優(yōu)化實(shí)驗(yàn)

　�。ㄈ�）結(jié)果與分析

　　1．碳源的選擇

　　2．氮源的選擇

　　3.無機(jī)鹽的選擇

　　4.磷酸鹽的選擇

　　5.響應(yīng)面法優(yōu)化培養(yǎng)基

　　（四）討論

　　四、主要參考文獻(xiàn)

　　[1]趙玉萍，朱春等.田口設(shè)計優(yōu)化曲霉產(chǎn)多糖培養(yǎng)基.食品科技，2011，36（7）：16-19

　　[2]喬均儉，王世英，郝粉霞等.響應(yīng)面法優(yōu)化黑曲霉產(chǎn)果膠培養(yǎng)基中無機(jī)鹽成分的研究.生物數(shù)學(xué)學(xué)報，2010,25(3):508-514

　　[3]劉偉雄.游離果膠酶和固定化果膠酶酶學(xué)性質(zhì).[J]食品研究與開發(fā)，2001，22（4）:5-7

　　[4]Zhou X,Zheng Y,et al.Fermentation medium optimization of themophilic proteinase by response surface methodology [J] Journal of Biomathematics,2007,22(1):113-118

　　[5]杜國軍，劉曉蘭，鄭喜群.產(chǎn)果膠酶黑曲霉發(fā)酵條件的優(yōu)化[J].農(nóng)業(yè)與技術(shù)，2008,28（5）：83-85

　　[6]牛廣才，朱丹，李志江.響應(yīng)面法優(yōu)化桑黃菌產(chǎn)胞外多糖液體發(fā)酵培養(yǎng)基的研究[J]生物數(shù)學(xué)學(xué)報，2009,24（3）:523-530

　　[7]張雙鳳，林香娟，于村.苯酚—硫酸法測定胖大海涼茶中多糖的研究.河南預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志，2000,11（3）：144-145

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