人朊蛋白不同N-糖基化修飾突變體的構(gòu)建及其在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中表達(dá)

構(gòu)建并表達(dá)人朊蛋白N-糖基化修飾位點(diǎn)突變的真核表達(dá)載體,有助于進(jìn)一步研究朊蛋白N-糖基化修飾的生物學(xué)功能.定點(diǎn)突變野生型人朊蛋白基因PRNP,將獲得的突變體亞克隆至真核表達(dá)載體pcDNA3.1中,并在人宮頸癌細(xì)胞株HeLa中瞬時(shí)表達(dá)各種朊蛋白糖基化修飾位點(diǎn)突變體,利用免疫印跡和糖苷酶消化等糖蛋白分析方法鑒定表達(dá)產(chǎn)物的糖基化形式.經(jīng)Western blot鑒定,野生型和突變型朊蛋白表達(dá)產(chǎn)物出現(xiàn)不同形式的泳動(dòng)特征,分別出現(xiàn)特異性糖基化修飾的多個(gè)條帶,單糖基化修飾的兩條條帶和無糖基化修飾的一條條帶.經(jīng)PNGase F糖苷酶消化,野生型和糖基化單點(diǎn)突變型表達(dá)產(chǎn)物均能被糖苷酶消化,其分子量下移,去糖基化突變型表達(dá)產(chǎn)物的分子條帶位置不變.通過突變野生型人朊蛋白基因PRNP的N-糖基化修飾位點(diǎn),獲得單糖基化修飾和去N-糖基化修飾的6種人朊蛋白突變體,并能夠在HeLa細(xì)胞株中瞬時(shí)表達(dá)單糖基化修飾和去N-糖基化修飾朊蛋白,為進(jìn)一步研究朊蛋白的相關(guān)功能建立良好基礎(chǔ).

作 者： 楊洋 陳嵐 韓兵社 許彩民 潘華珍 YANG Yang CHEN Lan HAN Bing-She XU Cai-Min PAN Hua-Zhen   作者單位： 中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所,中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院,醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,北京,100005  刊 名： 生物工程學(xué)報(bào)  ISTIC PKU 英文刊名： CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY  年，卷(期)： 2006 22(3)  分類號(hào)： Q513+.2 Q812  關(guān)鍵詞： 朊蛋白   N-糖基化修飾   糖蛋白  

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