人α防御素融合表達(dá)、純化及生物活性檢測(cè)

目的:獲得大量重組人α防御素(HDα)并檢測(cè)其活性,為其深入研究提供必要的材料.方法:體外化學(xué)合成得到帶有羥氨裂解位點(diǎn)編碼序列的HDα基因片段,克隆入pBV220-IL-4表達(dá)載體構(gòu)建重組表達(dá)載體pBV220-IL-4- HDα.測(cè)序正確后將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入大腸桿菌DH5α中進(jìn)行溫度誘導(dǎo)表達(dá).經(jīng)羥氨裂解去除IL-4后,對(duì)所得蛋白進(jìn)行純化、復(fù)性,以SDS-PAGE和生物學(xué)活性檢測(cè)鑒定其特性.結(jié)果:經(jīng)溫度誘導(dǎo)后,融合蛋白主要以包涵體的形式表達(dá),表達(dá)產(chǎn)物約占菌體總蛋白的20%;羥氨裂解切除IL-4后,所得目的蛋白的純度約為99.8%.抑菌活性試驗(yàn)和克隆形成試驗(yàn)顯示,所得HDα對(duì)細(xì)菌生長(zhǎng)有明顯的抑制作用.結(jié)論:成功地構(gòu)建了HDα基因的重組表達(dá)質(zhì)粒,獲得穩(wěn)定表達(dá)的工程菌,并建立了復(fù)性與純化技術(shù),為進(jìn)一步對(duì)其進(jìn)行功能研究與應(yīng)用奠定了基礎(chǔ).

作 者： 傅海燕 張劍 路凡 蒲勤 王孝功 盧茲凡 徐俊卿 趙忠良 FU Hai-yan ZHANG Jian LU Fan PU Qin WANG Xiao-gong LU Zi-fan XU Jun-qing ZHAO Zhong-liang   作者單位： 傅海燕,張劍,路凡,蒲勤,王孝功,盧茲凡,趙忠良,FU Hai-yan,ZHANG Jian,LU Fan,PU Qin,WANG Xiao-gong,LU Zi-fan,ZHAO Zhong-liang(第四軍醫(yī)大學(xué)基礎(chǔ)部生物化學(xué)與分子生物學(xué)教研室,陜西,西安,710032)

徐俊卿,XU Jun-qing(第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院放射科,陜西,西安,710032) 

刊 名： 細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志  ISTIC PKU 英文刊名： CHINESE JOURNAL OF CELLULAR AND MOLECULAR IMMUNOLOGY  年，卷(期)： 2006 22(2)  分類(lèi)號(hào)： Q786  關(guān)鍵詞： 人α防御素(HDα)   表達(dá)   純化   生物學(xué)活性   檢測(cè)  

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