人cubilin蛋白功能片段原核表達(dá)系統(tǒng)的建立

目的構(gòu)建編碼白蛋白吞飲受體人cubilin(hcubilin)蛋白配體結(jié)合域CUB7-8基因片段的原核表達(dá)載體,誘導(dǎo)表達(dá)并鑒定表達(dá)產(chǎn)物.方法重組DNA技術(shù)構(gòu)建原核表達(dá)載體pGEX-hCUB7-8,IPTG誘導(dǎo)表達(dá),SDS-PAGE與免疫印跡法鑒定表達(dá)產(chǎn)物,Pull down實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證融合蛋白是否與白蛋白結(jié)合.結(jié)果雙酶切和測(cè)序鑒定表明CUB7-8片段插入正確,誘導(dǎo)表達(dá)后獲得分子量為52×103的融合蛋白,該融合蛋白可以被抗GST抗體識(shí)別,并且可以和白蛋白結(jié)合.結(jié)論CUB7-8基因片段編碼的蛋白質(zhì)能在原核細(xì)胞中正確表達(dá),并且可以和白蛋白結(jié)合,這為進(jìn)一步研究該功能域的結(jié)構(gòu)與功能奠定了基礎(chǔ).

作 者： 李新倫 何婭妮 楊聚榮 梁海君 林靜 李開(kāi)龍 丁涵露 張建國(guó) LI Xin-lun HE Ya-ni YANG Ju-rong LIANG Hai-jun LIN Jing LI Kai-long DING Han-lu ZHANG Jian-guo   作者單位： 第三軍醫(yī)大學(xué)大坪醫(yī)院野戰(zhàn)外科研究所腎內(nèi)科,重慶,400042  刊 名： 第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)  ISTIC PKU 英文刊名： ACTA ACADEMIAE MEDICINAE MILITARIS TERTIAE  年，卷(期)： 2006 28(10)  分類號(hào)： Q51 Q591.2 Q75  關(guān)鍵詞： cubilin   pGEX-4T-1   融合蛋白   白蛋白  

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