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米曲霉堿性蛋白酶基因的前導(dǎo)區(qū)對其在畢赤酵母中表達(dá)的必要性
為探討前導(dǎo)區(qū)對米曲霉堿性蛋白酶基因在畢赤酵母中表達(dá)的必要性,本試驗首先將米曲霉堿性蛋白酶的成熟肽編碼基因(alp-m)和表達(dá)載體pPIC9K雙酶切后連接,得到重組表達(dá)載體pPIC9K/alp-m.然后將其線性化后電轉(zhuǎn)化畢赤酵母GS115.篩選陽性轉(zhuǎn)化子進(jìn)行甲醇誘導(dǎo)表達(dá),并進(jìn)行SDS-PAGE分析和堿性蛋白酶活力測定,同時在轉(zhuǎn)錄水平上對目的基因進(jìn)行了Northern blot檢測.將得到的結(jié)果與以前研究中得到的帶有前導(dǎo)區(qū)的米曲霉堿性蛋白酶成熟肽基因在畢赤酵母中的表達(dá)結(jié)果進(jìn)行對比.結(jié)果表明:如果沒有前導(dǎo)區(qū),米曲霉堿性蛋白酶成熟肽基因在畢赤酵母中表達(dá),無論在胞內(nèi)和胞外均檢測不到目的蛋白.由此可見,米曲霉堿性蛋白酶基因在畢赤酵母中表達(dá)時必須有前導(dǎo)區(qū)的參與.
作 者: 郭繼平 馬光 馬鶯 GUO Ji-ping MA Guang MA Ying 作者單位: 郭繼平,馬鶯,GUO Ji-ping,MA Ying(哈爾濱工業(yè)大學(xué),食品科學(xué)與工程學(xué)院,哈爾濱,150086)馬光,MA Guang(東北林業(yè)大學(xué),生命科學(xué)學(xué)院,哈爾濱,150040)
刊 名: 上海交通大學(xué)學(xué)報(農(nóng)業(yè)科學(xué)版) ISTIC 英文刊名: JOURNAL OF SHANGHAI JIAOTONG UNIVERSITY(AGRICULTURAL SCIENCE) 年,卷(期): 2008 26(3) 分類號: Q786 關(guān)鍵詞: 米曲霉堿性蛋白酶基因 前導(dǎo)區(qū) 畢赤酵母 異源表達(dá)【米曲霉堿性蛋白酶基因的前導(dǎo)區(qū)對其在畢赤酵母中表達(dá)的必要性】相關(guān)文章:
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